Epsilon Archive for Student Projects

Abstract

Den senast utvecklade tekniken för riktade förändringar av genom in-vivo är baserad på CRISPR/Cas-systemet för vilket förutsättningarna i Nicotiana benthamiana och potatis,
Solanum tuberosum, här undersöktes. För att föra in genkonstruktioner i växterna användes Agrobacterium tumefaciens som via vakuum kommer i kontakt med de inre delarna av bladen varefter de gener som finns på en binär vektor uttrycks transient. Först undersöktes de
optimala parametrarna för erhållandet av ett högt transient uttryck med hjälp av ett grönt fluorescerande protein, GFP. Dessa parametrar användes sedan för att infiltrera en
CRISPR/Cas-konstruktion som designats för att introducera mutationer genom att klyva ett exon i genen för granulbundet stärkelsesyntas, GBSS. Det visade sig under första delen av arbetet att det ej gick att erhålla transient uttryck i potatis med denna metod. Därför
infiltrerades endast N. benthamiana med CRISPR/Cas-konstruktionen.

The latest technology for genome editing is based on the CRISPR/Cas-system. The purpose of this study was to examine the conditions for its use in Nicotiana benthamiana and potato, Solanum tuberosum. Agrobacterium tumefaciens was used to deliver the gene constructs via vacuum infiltration and, inside the leaves, produce a transient expression of a binary vector.

The optimal parameters for a high transient expression was first examined using a green fluorescent protein, GFP. These parameters were then used for infiltration of a CRISPR/Casconstruct designed to introduce mutations by cleavage of an exon in the gene coding for granule bound starch synthase, GBSS. The CRISPR/Cas-construct was infiltrated only to N. benthamiana due to the failure of producing a transient expression of GFP in potato.