Epsilon Archive for Student Projects

Abstract

Plant tRNA isopentenyltransferases (tRNA-IPT, EC 2.5.1.8) have two roles, modification of tRNA and contribution to cytokinin synthesis. tRNA-IPT is among the best studied of the tRNA-modifying enzymes, but little biochemical information is available and none for the plant enzymes. Therefore two sets of experiments were conducted.
The first one aimed to determine the kinetics and substrate specificity of the tRNA-IPT AtIPT2 from the higher plant Arabidopsis thaliana. The second project aimed to study the role of IPTs from the moss Physcomitrella patens in the production of cytokinin hormones.
In moss only tRNA-IPTs but no adenylate IPTs are present (Schwartzenberg et al.2007). Adenylate IPTs are the major source of cytokinins in higher plants. The moss also differs by having more tRNA-IPTs than any other organism known. The first goal was to determine if these IPTs actually modify tRNA, or if one or more are in fact cytokinin synthases. For these studies a yeast mutant (MT8) lacking the intrinsic IPT gene was used. The mutant was transformed with the IPT from P. patens. The tRNA obtained from MT8 was used for in vitro assays to study the substrate specificity of the Arabidopsis AtIPT2.

tRNA isopentenyltransferaser (tRNA-IPT, EG 2.5.1.8) har två funktioner, modifiera tRNA och bidra till cytokinin syntes. tRNA-IPT är bland de bäst studerade av alla tRNA enzymer, men trots detta finns endast lite biokemisk information tillgänglig, och ingenting är känt om växtenzymerna. Därför utfördes två experiment.
Det första var att bestämma kinetik och substratspecificitet för tRNA-IPT formen AtIPT2 från Arabidopsis thaliana .
Det andra projektet var att studera vilken roll olika IPT från mossan Physcomitrella patens har för produktionen av cytokinin hormoner.
I mossa finns bara tRNA-IPT men inte adenylat-IPT (Schwartzenberg et al.2007). AdenylatIPT är den största källan för cytokininer i högre växter. Mossan skiljer sig också genom att ha många fler tRNA-IPT gener än någon annan känd organism. Det första målet var att bestämma om dessa IPT faktiskt kan förändra tRNA, eller om en eller flera av dessa i själva verket är cytokinin syntaser. För dessa studier användes en jäst mutant (MT8) som saknar IPT genen. Jästmutanten transformerades med IPT från P. patens. Erhållen tRNA från MT8 användes för in vitro tester för att studera substrat specificitet för AtIPT2 från Arabidopsis.