Epsilon Archive for Student Projects

Abstract

En nutida teknik inom stamcellsodling har möjliggjort att odla fram organoider i labb-miljö som ska efterlikna ursprungsvävnaden och kan således fungera som en djuretisk försöksmodell i linje med de 3R som syftar till att ersätta, reducera och förfina experimentella studier där djur ingår.
Syftet med denna studie var att odla organoider från hästens blindtarm (caecaloider), vilket aldrig har beskrivits i litteraturen. Stamceller isolerades från blindtarmsvävnad efter avlivning av hästen. Caecaloiderna odlades genom tillsatser av tillväxtfaktorer som stimulerar proliferation och differentiering av olika epitelcelltyper. Vid undersökning av genuttryck med Reverse-Transcritp-tase qPCR sågs uttryck från cellmarkörer som representerar epitelceller (EPCAM), bägarceller (MUC2) och stamceller (PCNA och SOX9) i caecaloiderna, vilket jämfördes med ursprungs-vävnaden. Histologisk undersökning av caecaloiderna visade på rikligt med bägarceller, vilket ytterligare är tecken på differentiering.
Slutligen kunde vi med resultaten från denna studie konstatera att det går att odla och biobanka organoider från hästens caecum, något som hittills inte gjorts. Caecaloiderna hade genetiska och morfologiska egenskaper som efterliknade tarmepitelet i blindtarmen. Detta är en viktig pusselbit i att skapa en in vitro-modell för blindtarm på häst som kan användas för experimentella studier av värd-parasitinteraktioner och caecums barriärfunktion samt vid andra patologiska experiment, utan att hästar behöver utsättas för onödigt lidande i försöken.

A contemporary technique in stem cell cultivation has made it possible to grow organoids in laboratory environments that mimic the original tissue. These organoids can thus serve as an ethical alternative to animal models in experimental studies, in accordance with the 3Rs principle, which aims to Replace, Reduce, and Refine the use of animals in research. Organoids derived from the horse’s ceacum (caecaloids) have never been described to be cultivated in the literature. The aim of this study was to cultivate caecaloids.
The stem cells were isolated from intestinal tissue taken from the horse's ceacum after euthanasia. The caecaloids were cultivated by adding growth factors that stimulate the proli-feration and differentiation of various epithelial cell types. Investigation of gene expression using Reverse-Transcriptase qPCR revealed the expression of gene markers representing epithelial cells (EPCAM), goblet cells (MUC2), and stem cells (PCNA and SOX9) in the caecaloids, which were compared to the original tissue. Histological examination shows a rich presence of goblet cells, further indicating differentiation.
Finally, based on the results of this study, we could conclude that it was possible to culture organoids from the horse's caecum, something that has not been done previously. The caecaloids exhibited genetic and morphological features that resembled the cecal epithelium. This represents a key step in creating an in vitro model for the horse ceacum, which can be used for experiments on host-parasite interactions as well as other pathological studies without subjecting horses to unnecessary suffering in trials.